Render Target: STATIC
Render Timestamp:
7/9/2026, 8:30:41 PM EDT
7/10/2026, 12:30:41 AM UTC
Commit: 972bfd7b7ede29425a62cd0c0c52aa62818ed728
Cell Signaling Technology Logo - Extra Large
查看特别推荐 >>
1% for the planet logo
  1. 主页 /
  2. 学习与支持 /
  3. 操作步骤 /
  4. 嵌合抗体免疫组织化学实验步骤（石蜡切片）

嵌合抗体免疫组织化学实验步骤（石蜡切片）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯
  2. 组织级无水变性乙醇（100% 和 95%）
  3. 去离子水 (dH2O)
  4. 洗涤缓冲液：
    1. 1X Tris Buffered Saline with Tween 20 (TBST)：配制 1 L 1X TBST： 将 100 mL 10X Tris Buffered Saline with Tween 20 (TBST) #9997 加入到 900 mL dH2O 中，混合。
    2. 1X Phosphate Buffered Saline (PBS)：配制 1 L 1X PBS：将 100 mL 10X Wash Buffer, Phosphate Buffered Saline (PBS) #12528 加入到 900 mL dH2O 中，混合。
  5. SignalStain® Antibody Diluent：#8112
  6. 1X EDTA Unmasking Solution：配制 250 mL 1X EDTA Unmasking Solution：将 25 mL SignalStain® EDTA Unmasking Solution (10X) #14747 用 225 mL dH2O 稀释。
  7. 封闭液：1X TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution
    1. 1X TBST/5% Normal Goat Serum：将 250 µL Normal Goat Serum #5425 加入到 5 mL 1X TBST 中。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution：将 1 mL Animal-Free Blocking Solution (5X) #15019 加入到 4 mL dH2O 中。
  8. 荧光偶联的二抗：

    9. 重要事项：重组嵌合 单克隆抗体保留了源自 原始亲本宿主序列的抗原结合 Fab 区。 进行多重标记时，需使用兔 Fc 特异性二抗来 检测兔宿主一抗。 更多信息，请参阅产品网页或数据表上的 来源/纯化部分。

    使用兔 Fc 特异性二抗时，可能需要 更高浓度的一抗。每种一抗的最佳 稀释比例应通过滴定实验确定。

    此外，理解多重标记实验中 所用二抗的种属反应性特征 至关重要。若未使用 Cell Signaling Technology 推荐的二抗，建议在将此一抗 与不同宿主物种一抗组合使用前， 对二抗进行充分表征。

  9. 封片剂：使用 ProLong Gold AntiFade Reagent #9071、Prolong Gold AntiFade Reagent with DAPI #8961 或 DAPI #4083。

B. 脱蜡/复水

注：在整个操作过程中，切勿让载玻片 变干。

  1. 脱蜡/水化合步骤：
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次，每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育 2 次，每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育 2 次，每次 10 分钟。
  2. 将切片放入 dH2O 中洗涤两次，每次 5 分钟。

C. 抗原修复

  1. 将载玻片浸入 1X EDTA Unmasking Solution 中，置于微波炉内加热 至沸腾，随后在亚沸温度 (95°-98°) 下 保持 15 分钟。无需冷却。

D. 染色

  1. 将切片放入 dH2O 中洗涤两次，每次 5 分钟。
  2. 将切片放入 1X TBST 洗涤 5 分钟。
  3. 每张切片用 100-400 µL 首选封闭液在室温下封闭 1 小时。
  4. 去除封闭液。向每张切片加入 100-400 µL 用 SignalStain® Antibody Diluent #8112 稀释的一抗（多重标记时为抗体混合物）。
  5. 在 4°C 下过夜孵育。
  6. 用 1X PBS 避光漂洗三次，每次 5 分钟。
  7. 将样品与用 SignalStain® Antibody Diluent #8112 稀释的荧光偶联二抗（多重标记时为二抗混合物）在室温避光下孵育 1 小时。
  8. 用 1X PBS 避光漂洗三次，每次 5 分钟。
  9. 若使用 ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 封片，则可省略 此步骤：按照制造商建议配制 DAPI 溶液，加入每张切片，避光孵育 5 分钟。
  10. 用 1X PBS 避光漂洗三次，每次 5 分钟。
  11. 使用 ProLong Gold Antifade 试剂封片。
  12. 要达到最佳效果，让封片液在室温下过夜固化。 长期保存时，将载玻片平放于 4°C 避光 保存。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

发布于 2026 年 4 月